作者：黃勝忠、蔡奇助、許謙信

　　 設計一組引子 (primer) ，序列分別為 IT1-5’CGTAACAAGGTTTCC3’ 和 IT2-5’ AGTTTCTTCTCCTCC3’ ，可有效複製 6 個菊花品種 ( 系 ) 的 5.8S 核糖體核酸 (rRNA) 基因與內轉錄間隔區 (internal transcribed spacer, ITS) ，經聚合酶連鎖反應 (polymerase chain reaction, PCR) 複製產物長度為 747 bp 。將其中一品種的內轉錄間隔區進行定序，扣除兩端引子長度 (30 bp) ，總長為 717 bp ，與其他高等植物的相同區域比較，發現 PCR 產物有 27 bp 屬於 18S rRNA 基因的 3’ 端，與 52 bp 屬於 26S rRNA 基因的 5’ 端。因此，內轉錄間隔區實長為 638 bp ，此區包含 ITS1 、 5.8S rRNA 基因與 ITS2 等三區，其長度分別為 253 bp 、 164 bp 及 221 bp 。由上述研究証實，本研究之引子可藉由 PCR 技術，將各菊花品種 ( 系 )rDNA 之 ITS 有效選殖，其中 ITS1 及 ITS2 為變異快速之 DNA 區域，可以由此獲得許多分子標誌，供未來應用於品種鑑別及新品種保護上。

關鍵字： 菊花、聚合酶連鎖反應、核糖體核酸、內轉錄間隔區。

　　Using polymerase chain reaction (PCR), the entire nucleotide sequences of internal transcribed spacer (ITS) region between 18S and 26S ribosomal RNA (rRNA) genes were amplified among six cultivars/lines of Dendranthema grandiflorum Ramat. Two primers for PCR, IT1-5’ CGTAACAAGGTTTCC 3’ and ITS2-5’ AGTTTCTTCTCCTCC 3’ were designed for amplification and sequencing. The length of PCR products including primers (30 bp) was 747 bp. To compare with other higher plant species, this sequence contained 27 bp of 18S rRNA gene, ITS region, and 52 bp of 26S rRNA gene. Therefore, the length of ITS region of D. grandiflorum is 638 bp in which 253 bp of ITS1, 164 bp of 5.8S rRNA gene, and 221 bp of ITS2 are present.

Key words: Dendranthema grandiflorum Ramat, PCR, rRNA, ITS region.