研究彙報第四十一期 ， Page 33-42 ，出版時間：1993-12， 詳細內容

水稻縞葉枯病毒之純化及部份性質研究

作者： 陳慶忠　黃婉玲

摘　　要

　　利 用 高 低 速 交 互 離 心 及 蔗 糖 梯 度 離 心 純 化 之 縞 葉 枯 病 毒 (rice stripe virus, RSV) ， A260/280 比 值 為 1.409±0.13 ， 平 均 每 公 克 水 稻 病 葉 可 純 化 27.8 病 毒 。 純 化 材 料 之 準 備 以 4 月 至 6 月 接 種 發 病 者 純 化 病 毒 濃 度 較 高 。 純 化 病 毒 經 SDS 裂 解 後 以 12.5% 膠 體 電 泳 分 析 得 到 分 子 量 34.7 K 鞘 蛋 白 一 種 。 前 述 純 化 病 毒 再 經 一 次 硫 酸 銫 等 密 度 離 心 所 得 病 毒 材 料 以 2% 醋 酸 雙 氧 鈾 溶 液 染 色 ， 可 觀 察 到 寬 度 約 10nm ， 長 度 不 一 ，最 長 為 40 呈 線 形 或 環 形 之 螺 旋 體 構 造 的 病 毒 顆 粒 。 利 用 western blotting 方 法 以 RSV 抗 血 清 與 RSV 及 玉 米 條 紋 病 毒 (maize stripe virus, MStV) 抗 原 作 用 時 有 免 疫 反 應 產 生 ， 但 與 水 稻 萎 凋 矮 化 病 毒 (rice wilted stunt virus, RWSV) 則 無 。 ELISA 以 RSV 抗 血 清 與 RSV 抗 原 有 專 一 性 反 應 ， 但 與 MStV 及 RWSV 均 呈 微 弱 免 疫 反 應 。

關鍵字： 水稻縞葉枯病毒、純化、電子顯微鏡、核蛋白、
血清類緣關係。

Purification, Partial Characterization and Serological Properties of Rice Stripe Virus

Ching-Chung Chen and Wan-Ling Huang

Summary

　　 Rice stripe virus (RSV) isolated in central Taiwan has been purified and partial characterized. RSV was purified from infected leaves of Oryza sativa L. by one cycle of differential centrifugation, followed by isopycnic centrifugation in cesium sulfate gradient. Preparation thus obtained has a maximum absorbance at 261 nm and a minimum at 236 nm. The A 260/280 ratio of purified nucleoprotein was 1.409 ± 0.13. The yield of purified RSV was 7.2 to 53 ? with an average of 27.8 ? per gram of rice leaf tissue. Purified RSV stained with uranyl acetate, appeared as a helical structure about 10 nm wide. The thread-like filaments about 100-600 nm either appeared as irregular circular form or flexible filaments. Sometimes, uncoiled filaments or filaments with branches were also observed. One species of capsid protein subunit with molecular weights estimated as 34.7 K was obtained in the purified preparation of RSV by SDS-PAGE procedure. In western blotting test, the antiserum produced against RSV reacted specifically with RSV but not with two other tenuiviruses, rice wilted stunt virus (RWSV) and maize stripe virus (MStV) . However, positive heterologous reactions were obtained between RSV antiserum and antigens of RWSV and MStV in indirect ELISA test, although the readings of the heterologous reation were relatively weak.

Key words: rice stripe virus, purification, electron microscopy, nucleoprotein, serological relationship.